二、将需灭菌的培育基、蒸馏水或其它器皿放入灭菌锅内，关闭锅盖，查看排气阀、安全阀状况，
三、翻开电源，查看参数设置是否正确，然后按下“work”键，灭菌锅开端作业；主动派凉气，到105℃时，底部排气阀门主动关闭，然后压力开端上升；
四、压力升** 0.15MPa（121℃）时，灭菌锅再次主动放气，然后开端记时，一般培育基灭菌20min，蒸馏水灭菌30min；
五、到达规则的灭菌时刻后，关闭电源，翻开放气阀缓慢放气；当压力指针降** 0.00MPa时，放气阀无蒸汽扫除时，方可敞开锅盖。 六、留意事项
1、汽未放尽前，不得敞开高压锅；
2、如果灭菌后的培育基在锅内不及时拿出，需在蒸汽放尽后将锅盖翻开，切忌将培育基关闭在锅内过夜。
3、压力表指针在0.05MPa以上时，不能过快放汽，以避免压力急速下降，液体滚沸，从培育容器中溢出。
4、操作过程，请留意安全，当心烫伤。
高温灭菌锅的运用方法
1．shou先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内参加适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。留意不要装得太挤，避免防碍蒸汽流转而影响灭菌作用。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，避免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方法一起旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧共同，勿使漏气。
4．用电炉或煤气加热，并一起翻开排气阀，使水欢腾以扫除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，操控热源，保持压力**所需时刻。本试验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。 5．灭菌所需时刻到后，堵截电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度天然下降，当压力表的压力降**0时，翻开排气阀，旋松螺栓，翻开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，翻开排气阀，就会因锅内压力俄然下降，使容器内的培育基因为内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，形成棉塞感染培育基而发生污染。
6．将取出的灭菌培育基放入 37℃温箱培育24小时，经查看若无杂菌成长，即可待用。
不过有几点要留意的： 1.锅内有必要要有足够的水。 2.锅的气密性一定要很好。
3.运用完后一定要放到合适温度才能够翻开。
